熒光光顯微鏡:技術(shù)見(jiàn)解和應(yīng)用
熒光顯微鏡是生物和生物醫(yī)學(xué)以及其他*域必不可少的工具,這是因?yàn)槠鋵傩猿隽藗鹘y(tǒng)光學(xué)顯微鏡所具有的屬性。
熒光顯微鏡的基本概念與明場(chǎng)相同,但是熒光和磷光用于照亮到達(dá)樣品的光。該技術(shù)涉及用特定波長(zhǎng)的光進(jìn)行照射,該光與樣品中熒光團(tuán)的吸收相匹配,從而使它們以較長(zhǎng)(較低能量)的波長(zhǎng)發(fā)射(或反射)光。照明通常使用氙弧燈或水銀蒸氣燈進(jìn)行,盡管LED和激光再次受到歡迎。入射光和發(fā)射光被光譜發(fā)射濾光片分開。
落射熒光顯微鏡在生命科學(xué)中非常常見(jiàn),照明光和發(fā)射光均穿過(guò)樣品物鏡。由于反射光是從物鏡中濾除的,因此這種布置可實(shí)現(xiàn)較高的信噪比。在更**的顯微鏡技術(shù)(例如共焦和全內(nèi)反射(TIRF))中也使用了相同的概念。
盡管許多物質(zhì)會(huì)自動(dòng)發(fā)出熒光,但仍有許多市售的熒光團(tuán)具有清晰的激發(fā)和發(fā)射光譜,可用于“染色”樣品中的特定結(jié)構(gòu)或分子。熒光團(tuán)的戰(zhàn)略選擇允許識(shí)別多個(gè)目標(biāo),只要可以清晰地分離發(fā)射光譜并將其與自發(fā)熒光區(qū)分開即可。
熒光成像可以觀察到超出光學(xué)顯微鏡分辨率極限的分子。它是臨床診斷和研究環(huán)境中的關(guān)鍵技術(shù),其*域包括:免疫學(xué),病理學(xué),微生物學(xué),遺傳學(xué)以及許多其他*域。特別是共聚焦熒光顯微鏡已成為研究活細(xì)胞結(jié)構(gòu)和分子動(dòng)力學(xué)的重要工具。熒光使能成像技術(shù),例如TIRF,F(xiàn)RET,F(xiàn)LIM,F(xiàn)LIP和FRAP。熒光顯微鏡對(duì)于識(shí)別熒光科學(xué),材料科學(xué),地質(zhì)學(xué),半導(dǎo)體檢查和環(huán)境保護(hù)中的礦物,污染物和雜質(zhì)也很重要。
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